免疫染色, Immunostaining

2018/05/28 Last update

 

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  1. 組織の固定

組織の固定 Fixation

抗体を用いた免疫染色 immunostaining で留意すべきことは,以下の3点である(1)。

 

  1. 目的タンパク質の抗原性の保持(抗体に結合できる状態が保たれているかどうか)
  2. 目的タンパク質の発現部位の保持(他の場所に移動していないかどうか)
  3. 組織の形態の保持

 

組織の一般的な固定法は以下の通り(1)。

 

  1. 未固定凍結: 未固定のまま OCT コンパウンドに包埋して凍結切片を作る。
    • 抗原性がよく保持されるが,形態の保持が悪い。
  2. 固定凍結: パラホルムアルデヒド PFAなどで固定したのち OCT コンパウンドに包埋し,凍結切片を作る。
    • 抗原性,形態ともによく保持される。
  3. パラフィン: パラホルムアルデヒド PFA などで固定したのちパラフィン包埋し,切片を作る。
    • 形態保持に優れるが,抗原性の保持が悪い。パラフィン切片に使用可能な抗体を選んで使う。
    • 標本は常温で保存が可能である。

     

     

固定液の種類


固定液には,大きく分けてアルデヒド系と有機溶剤系がある(1)。前者は低分子の不溶化や形態保持に優れるが,タンパク質やペプチドの抗原保持に難点がある。後者は脱水作用があり,組織が収縮してしまう可能性がある。高分子の抗原保持に優れる。

 

おそらく,最も汎用されているのが 4% パラホルムアルデヒドである。

 

4% パラホルムアルデヒド(10% ホルマリン)

 

> ホルマリンはパラホルムアルデヒドの35 - 38%溶液であるため,両者の組成はほぼ同じである。

References

  1. 蓮井 2012a. 免疫組織化学の基礎と応用. V. 組織・細胞の固定. 鹿児島大学レポジトリ http://hdl.handle.net/10232/15020